深入认识蛋白质在生物医用材料表面的吸附行为对于开发新一代具有优异组织相容性的材料具有重要意义。酶联免疫吸附测定方法是 20 世纪 70 年代后迅速发展起来呢的免疫测定法。是指固相吸附技术和免疫酶技术相结合的一种方法,它事将抗原和抗体宝贝在固定支持物上,酶标记的抗体或抗原与载体上相应的抗原、抗原形成酶标记的抗原抗体复合物,在一定的底物参与下,复合物上的酶催化底物使其水解、氧化或还原成为一种带色物质,由于在一定条件下,酶的降解底物和呈现色泽相光联,因此可用酶和底物反应生成的有色物质进行光密度测定,从而计算出参与反应的抗原和抗体的含量。 。由于酶的催化频率很高,故可极大地地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
这一方法的基本原理是: ① 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。 ② 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在测定时,把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开,最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ELISA 有三种方法: 1. 固相化抗体的夹心结构; 2. 固相化抗原的夹心结构; 3. 通过酶标记抗原(或抗体)与未标记的抗原(或抗体)进行竞争来标记抗原量。 ELISA 应用范围很广,而且正在不断扩大,原则上 ELISA 可以用于检测一切抗原、抗体或半抗原,可以直接定量测定液体中的可溶性抗原。 |