在耐热链霉菌生长过程中，能够产生大环内酯类抗生素碳霉素，且会产生乙酰基转移酶和异戊酰基转移酶两个关键酶，3′-O-乙酰基转移酶由基因acyA编码，4"-乙酰基转移酶由基因 acyB1 编码，它们能够将乙酰基和异戊酰基基团连接到碳霉素主体上。乙酰异戊酰泰乐菌素（AIV）是将泰乐菌素A 的3′位进行乙酰化，同时对4″位进行异戊酰化而形成的新化合物，其具有药效强，药物残留量低，细菌不易产生耐药性，毒性小的优点，因而具有更高的应用价值，因而通过改造耐热链霉菌产生更多的AIV是我们的实验目的。由于在耐热链霉菌的培养基中加入泰乐菌素，将会产生碳霉素，3′-乙酰泰乐菌素，4″-异戊酰泰乐菌素以及AIV等多种抗生素，它们之间比例和AIV产量检测方法的确定是实验的基础，目前我们采用高相液相与质谱的方法。
这个实验中我们主要探索了流动相成分，流速，检测波长的影响，通过多次实验的对比，AIV的检测条件为：以乙睛:乙酸胺缓冲液=60:40(V/V)为流动相，1ml/min的流速，385nm处的检测波长，大约3min左右出峰，AIV标品使用甲醇溶解。而泰乐菌素的检测条件为：以乙腈：0.01mol/LNa2HPO4(358.14)=34：66为流动相，l.0mL/min的流速，280nm的紫外检测波长，泰乐菌素用甲醇溶解。这个条件产生的谱图分离度高，峰形对称，无拖尾的不良现象。 |