为加强研究生学术交流活动,推进学术创新,特开通“研究生学术报告预告区”。我校研究生和教师可以在预告区及时发布和了解有关研究生学术报告的信息,届时参加。也可就某学术报告展开专题讨论与交流。
本次报告的内容主要包括以下几个方面:
(1)PCR扩增获取目的片段
在基因同源臂重组的原理基础上,设计PCR所需引物,以集胞藻基因组为模板进行PCR,得到被敲除基因上下游片段,再通过融合PCR与相应抗性基因片断连接,得到目的片段。
(2) 融合片段的自然转化
由于集胞藻有天然吸收外源基因的能力,采用自然转化的方法,将目的片段与重悬后的集胞藻细胞混合,弱光的条件下培养5h,涂在含有抗性的平板上。
(3)突变体的鉴定
由于集胞藻6803 的染色体有10个左右拷贝数,在抗性平板上进行传代培养以进行染色体分离。之后,以野生型和突变体总DNA为模板,进行菌落PCR,再经过琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。