本次报告主要针对微藻-细菌混合体系的群落结构和多样性分析方法进行阐述总结。
(1) 体系中细菌分析，提取水样微生物群落总DNA，采用PCR对16S V3区进行扩增，并进行16S rDNA DGGE凝胶电泳，用Quantity one软件进行分析。切割PCR-DGGE条带，以341f和534r为引物，进行16S rDNA V3区PCR重扩增，并用PCR产物纯化试剂盒进行纯化。对DGGE条带克隆，转化后挑取阳性克隆，进行测序。DGGE指纹图谱分析采用 Quantity one软件对DGGE指纹图谱进行平均聚类分析；
(2) 提取样品总DNA后，根据设计得到ITS高变区的ITS1区域合成的引物，合成引物接头，进行PCR扩增并纯化产物，再对PCR产物进行均一化，建好的文库用Illumina hiSeq2500 PE100进行测序；
(3) 通过对ITS高变区测序序列，按照微生物种群ITS相似度进行分类，得到微生物种群多样性，根据OTU得到生物学分类结果，并分析不同样品的微生物群落结构与多样性。 |