内容提要：
1. pET30a-Gene 重组载体的构建
本次报告的内容主要包括以下几个方面：
(1) 克隆目的基因
对集胞藻6803内有机溶剂耐受相关基因进行了引物设计，其中引物两段都加上Nde1-EcoR1的双酶切位点，以集胞藻6803的基因组DNA为模板获得目的基因片段，通过电泳胶图确认克隆目的基因的大小与基因本身的大小一致。
(2) 载体与目的基因的酶切、连接
分别对表达载体pET-30a及目的基因用Nde1-EcoR1进行双酶切，酶切后对目的基因直接进行产物纯化，对酶切后的载体进行切胶回收，然后利用T4 DNA Ligase 进行连接，获得重组载体。
(3)重组载体转化感受态细胞
将重组质粒按照一定的方法转化到感受态细胞Trans5a内，转化后通过涂Cm抗性平板进行转化子筛选，37℃培养过夜。
(4)重组子的筛选与验证
首先通过Clony-PCR的方法对选取的单菌落进行验证，验证完成后需通过提取质粒进一步进行酶切验证，电泳后通过胶图就可以确定出真正的重组子。 |