2. 重组子(pET30a-Gene)的表型筛选
本次报告的内容主要包括以下几个方面:
(1)正常培养基中重组子的表型变化
为了验证载体pET30a的转入对菌体本身并没有影响,所以需要对构建好的重组子进行表型验证。
通过测定其生长曲线可以判断出重组子以及空载体的转化子与野生型菌株的生长并没有差别。
(2)乙醇压力条件下突变株的表型变化
实验设计:
首先,在平板上对突变株进行表型筛选:一次设置4%、4.5%、5%三个乙醇浓度梯度,并设置三个浓度梯度下加诱导剂IPTG(0.1 mM)以及空白平板培养基作为对照。将培养好的种子初始OD630设置为0.1,然后一次进行梯度稀释0.01、0.001、0.0001、0.00001,以后3个梯度点板,37℃培养约16h后分析实验结果。
其次,摇瓶内进一步验证野生株和突变株的表型变化。由于实验条件的限制,先分析了两个突变株、一个空载及野生株在4%乙醇压力和IPTG诱导条件下的表型变化,设置两个平行样测定生长曲线。
结果分析与讨论:
从平板上菌株的生长状况可以看出:在乙醇压力下突变株与野生株生长状况没有区别,但在诱导条件下,野生株均比突变株长势好。
从生长曲线可以看出:在乙醇压力下突变株与野生株生长状况没有区别,但在诱导条件下,野生株也均比突变株长势好。
结论:
由于pET载体为强启动子,在诱导条件下绝大部分能量用于产生目的蛋白,而运用到生长上的能量减少,导致菌体在诱导条件下无法正常生长。
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